武汉大学开发出非洲猪瘟快速检测试纸条
摘要： 4月7日，武汉大学科医学部免疫与代谢前沿科学中心的一个科研团队，与哈兽研的一个研究团队，一起在《CellDiscovery》杂志上发表文章，表示开发出高灵敏度且经济的非洲猪瘟试纸条检测技术，
4月7日，武汉大学科医学部免疫与代谢前沿科学中心的一个科研团队，与哈兽研的一个研究团队，一起在《Cell Discovery》杂志上发表文章，表示开发出高灵敏度且经济的非洲猪瘟试纸条检测技术，认为将在非洲猪瘟病毒现场监测中有巨大应用潜力。
该试纸条技术的开发基于CRISPER-Cas技术，一种可以用于精确基因工程、转录调节以及其他应用领域的革命性的工具手段。几种II类Cas核酸内切酶可以实现对核酸进行灵敏和稳定的检测。其中Cas12可以特异性地识别某些双链DNA序列，然后非特异性剪切单链DNA，所以特别适用于双链DNA病毒的检测。结合等温扩增，该团队发现Cas12用于检测非洲猪瘟病毒具有非常高的灵敏度和精确度。
Cas12对于碱基对变异容忍度低，确保其不会与其他猪病原发生反应。研究团队使用另外5中猪病原进行的测试也印证了这一点。
Cas12技术在此之前曾被开发用于一些临床样品的检测，但是通常使用荧光报告基因，这样这种方法就只能被限制在实验室使用。而该研究团队希望能够开发出一个不依赖实验室设备的可以现场使用的试纸条产品。通过对各种参数的全面优化，最终获得了成功。他们开发出的试纸条的灵敏度可以达到200个拷贝/样本，与qPCR方法的灵敏度相当。低检测极限使其可以用于感染的早期检测。
尽管效果很好，但是商业化的试纸条可能会因为价格昂贵而限制该方法的现场使用。于是该团队开发了手工试纸条的手工自制作方法，整个试纸条手工完成。经过检测与商业试纸条效果相当。自制试纸条结果可靠、制作简单、成本更低。
该团队总结表示，他们所开发的这种基于Cas12a的试纸条技术是一种可应用于现场检测、具有成本优势、高度灵敏和高准确度的非洲猪瘟检测方法。
Cas12a试纸条与aPCR效果对比
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样本编号
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样本类型
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qPCR 拷贝数/ μl
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基于Cas12a 的试纸条
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1
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血
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8.62E + 06
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阳性
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|
2
|
血
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9.99E + 05
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阳性
|
|
3
|
血
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1.16E + 06
|
阳性
|
|
4
|
血
|
5.87E + 06
|
阳性
|
|
5
|
血
|
5.55E + 06
|
阳性
|
|
6
|
血
|
2.43E + 07
|
阳性
|
|
7
|
血
|
3.00E + 06
|
阳性
|
|
8
|
血
|
1.29E + 06
|
阳性
|
|
9
|
血
|
–
|
阴性
|
|
10
|
血
|
–
|
阴性
|
|
11
|
血
|
–
|
阴性
|
|
12
|
口腔拭子
|
6.19E + 02
|
阳性
|
|
13
|
口腔拭子
|
3.64E + 02
|
阳性
|
|
14
|
口腔拭子
|
3.32E + 02
|
阳性
|
|
15
|
口腔拭子
|
6.84E + 02
|
阳性
|
|
16
|
口腔拭子
|
2.98E + 03
|
阳性
|
|
17
|
口腔拭子
|
1.01E + 03
|
阳性
|
|
18
|
口腔拭子
|
4.61E + 03
|
阳性
|
|
19
|
口腔拭子
|
3.04E + 03
|
阳性
|
|
20
|
口腔拭子
|
1.66E + 03
|
阳性
|
|
21
|
口腔拭子
|
–
|
阴性
|
|
22
|
肛门拭子
|
1.34E + 03
|
阳性
|
|
23
|
肛门拭子
|
2.97E + 02
|
阳性
|
|
24
|
肛门拭子
|
6.90E + 03
|
阳性
|
|
25
|
肛门拭子
|
1.47E + 03
|
阳性
|
|
26
|
肛门拭子
|
1.96E + 03
|
阳性
|
|
27
|
肛门拭子
|
1.10E + 03
|
阳性
|
|
28
|
肛门拭子
|
1.08E + 03
|
阳性
|
|
29
|
肛门拭子
|
–
|
阴性
|
|
30
|
肛门拭子
|
–
|
阴性
|
试纸,Cas
